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四元低压梯度泵的梯度洗脱原理

点击次数:432  发布时间:2018-04-15
 四元低压梯度泵的梯度洗脱原理:  
    具体地讲,当样品随梯度起点的流动相进入色谱柱入口时,由于起点流动相中弱洗脱溶剂A含量较高,强洗脱溶剂B含量较低,化合物C1(保留性适中)和化合物C2(保留较强)因分配系数(k值)较高而滞留于色谱柱入口附近,几乎未移动。一段时间后,B增加到一定数值,C1的k值达到足够小(比如小于10),其在柱中的移动速率明显增大,并且随着B的增加,其移动速率愈加快速,直到tC1时流出色谱柱,被检测器检测到并被记录成色谱峰C1,tC1虽然比等度时的保留时间长很多,但C1的的平均k值却很小,因而色谱峰并未展宽,灵敏度仍处于较高水平。B持续增加,在随后的某个时间点,C2的k值也降到10以下,C2的移动速率也开始变快,以与C1类似的方式于tC2被洗脱出色谱柱,其平均k值同样很小,色谱峰亦未展宽,灵敏度处于较高水平。  
    流动相的梯度变化即流动相极性、PH值等的梯度变化,即洗脱能力成梯度变化。  
四元低压梯度泵的洗脱要求:  
    1.洗脱液体积应足够大,一般要几十倍于床体积,从而使各峰完全或基本分离;  
    2.梯度的上限(强洗脱溶剂的比例)要足够高,使紧密吸附的物质能被洗脱下来。  
    3.梯度不要上升太快,要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。目的物的过早解吸,会引起区带扩散;而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。
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